染色体核型分析传统技术——GRQ带技术

[日期:2010-10-19   作者:方慧云   科室:肿瘤研究所 ]

    人类染色体用Giemsa染料染色呈均质状,但是如果染色体经过变性和(或)酶消化等不同处理后,再染色可呈现一系列深浅交替的带纹,这些带纹图形称为染色体带型。显带技术就是通过特殊的染色方法使染色体的不同区域着色,使染色体在光镜下呈现出明暗相间的带纹。每个染色体都有特定的带纹,甚至每个染色体的长臂和短臂都有特异性。根据染色体的不同带型,可以更细致而可靠地识别染色体的个性。染色体特定的带型发生变化,则表示该染色体的结构发生了改变。一般染色体显带技术有G显带(最常用),Q显带和R显带等。G带技术是其中最常用的技术,由Pardue等建立。方法是先用加热或蛋白水解酶处理未染色的中期染色体片,然后用吉姆萨(Giemsa) 染料染色,结果染色体呈现清晰、特异的G带。G带反映了染色体DNA上A-T的丰富区,在人类中约有2000条G带可被鉴别。G带不仅稳定且用扫描电镜可在带区见到收缩的痕迹。现在已制成人类的G带标准图谱,可用于鉴定染色体号数以及基因定位。在植物中G分带技术尚不成熟,不少植物中难以显示G带或者结果很不稳定。Q带是在1968年由Caspersson等建立的。这种方法是将中期染色体用芥子奎吖因染色,在染色体的G带相同区域产生另外荧光带,在荧光显微镜下可以清晰地看到。虽然可以用于诊断,但受到荧光染色所限,不能长期保留。R带是和G带相反的带,即G带的深染区正是R带的浅染区,G带的浅染区又正是R带的深染区。R带也就是反带的意思。这种方法是由Dutrillaux等建立的。方法是将中期未染色的片子放在pH 4~4. 5、温度为88℃的1 mmol/L的NaH2PO4溶液中温育,然后再染色,即可染成R带。R带的DNA在细胞周期S期早复制,富带的DNA在S期晚复制,富含AT和长分散核元件序列。可以认为染色体的条带为染色体结构单位,相当于复制子族。此外,根据基因的复制时间与显带特点可以推断,管家基因一般是早复制,多位于R带中,而组织特异性基因晚复制,多位于G带中。